Luciferase Reporter Πρωτόκολλο Δοκιμασίας

Το φως που παράγεται από πυγολαμπίδες έχει γίνει ένα σημαντικό εργαλείο για μοριακούς βιολόγους . Firefly βιο - φωταύγεια - που παράγεται από τη μετατροπή της λουσιφεράσης λουσιφερίνη να οξυλουσιφερίνη - εντοπίστηκε για πρώτη φορά , η οποία χαρακτηρίζεται και εξελίχθηκε σε δοκιμασία ανταποκριτή λουσιφεράσης από ερευνητές του Πανεπιστημίου της Καλιφόρνια , Σαν Ντιέγκο , το 1986 . Ορισμοί
Η

Δεσοξυριβονουκλεϊκό οξύ ( DNA ) χρησιμεύει ως το γενετικό υλικό των κυττάρων . Μία αλληλουχία προαγωγέα του ΟΝΑ ελέγχει την έκφραση ενός γονιδίου - μία αλληλουχία DNA η οποία παράγει μια συγκεκριμένη πρωτεΐνη . Ως ένα ξεχωριστό κομμάτι του DNA , ένα πλασμίδιο περιέχει ένα γονίδιο , όπως λουσιφεράση .
Εικόνων Μέθοδοι
Η

Ένας επιστήμονας κατασκευάζει ένα πλασμίδιο που περιέχει ένα προαγωγό και το γονίδιο της λουσιφεράσης . Αυτό το πλασμίδιο επιμολύνει - εισάγεται βιολογικά , χημικά ή μηχανικά - σε ένα κύτταρο ζώου , και αργότερα αυτό το κελί είναι σπασμένα ανοιχτό για να απελευθερώσετε τυχόν παράγεται λουσιφεράση . Λουσιφερίνη προστίθεται σε αυτό το μίγμα των κυττάρων , και η ποσότητα των βιο- φωταύγεια που παράγεται από την μετατροπή της λουσιφεράσης λουσιφερίνη να οξυλουσιφερίνη μετριέται. Κιτ και λεπτομερή πρωτόκολλα είναι εμπορικά διαθέσιμα για αυτή τη δοκιμασία .

Η Χρήσεις
Η

Η ποσότητα του βιο- φωταύγεια που παράγεται σε αυτή τη δοκιμασία είναι ανάλογος προς την αντοχή των προαγωγέα , και ως εκ τούτου χρησιμεύει ως μία χρήσιμη μέθοδος για τη σύγκριση διαφορετικών προαγωγούς. Αυτό έχει ιδιαίτερη σημασία σε βιομηχανικές ρυθμίσεις , όπως το βελτιστοποιημένο υποκινητές θα μπορούσε να αυξήσει την ποσότητα της πρωτεΐνης που παράγεται στο ίδιο χρονικό διάστημα .
Η
εικόνων